一、肾小管间质纤维化模型背景简介
以不溶性结晶的形式大量沉积于肾小管,引起肾小管阻塞,导致肾后梗阻,造成肾小管部分扩张、变性和坏死,间质淋巴和单核细胞浸润,并可见成纤维细胞增生。病变晚期可见2,8-二羟基腺嘌呤结晶,周围形成大量肉芽肿样增生结节,肾间质广泛纤维化。
二、肾小管间质纤维化模型简介
TIF的病因复杂、临床病程漫长,对其病理过程进行动态研究比较困难,因此,典型而稳定的动物模型是研究TIF的重要手段。常见TIF实验模型建立方法包括药物诱导、免疫介导、肾次全切除、单侧尿路阻塞、放射损伤等方法,均有各种不足和弊端,难以获得稳定的结果。
三、肾小管间质纤维化模型构建方法
3.1实验动物
Wistar雄性大鼠,6周龄
3.2实验材料
雌二醇,ssd,ss缝合线
3.3模型构建流程
动物和试剂 选用Wistar雄性大鼠,体重150~200g,适应环境1周后,随机分组。分笼饲养,自由饮食。造模前将腺嘌呤以2%淀粉溶液溶解,制成混悬液。
2.模型制备 模型组以150mg/kg腺嘌呤混悬液灌胃,对照组以相同体积的淀粉溶液灌胃。1次/天,连续17周。
3.样本采集和指标测定 分别于第3、7、12、17周4个时间点收获动物样本,进行功能学、组织学、免疫组化检测与观察。
三、模型验证
功能学检查:测定24小时尿蛋白含量、尿中尿N乙酰β葡萄糖苷酶含量、血清中Cr和BUN含量。
组织学观察:分别于实验的第7、12、17周处死动物,肾组织H&E常规染色和Masson染色。光镜下计算肾间质纤维化指数。高倍镜下随机选取10个不重叠视野测定间质纤维化面积与同视野小管间质总面积的百分比。